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>>Colorants de Gram

24 février 2014
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Niveau de mise à jour : 5

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Relecture - mise à jour : 24/02/14.

Globalement :

- violet de gentiane phéniqué : violet de gentiane : 10 g ; phénol : 20 g ; éthanol (95 °GL) : 100 ml ; eau distillée : 1 l ;
- solution iodée de gram ou lugol : iodure de potassium : 20 g ; iode métalloïde I2 : 10 g ; eau 1 l ;
- solution de safranine : safranine O :25 g ; éthanol à 95 °GL : 100 ml ; solution aqueuse d’oxalate d’ammonium à 25 g/l : 800 ml ;
- ou fuchsine pour Gram : fuchsine de Ziehl = fuchsine basique : 10 g ; phénol : 50 g ; éthanol : 100 ml ; eau distillée : 1 l. Diluer au 1/10° pour la fuchsine pour Gram ;
- décolorant alcool acétone : éthanol (alcool) "absolu" 5 volumes ; acétone : 1 volume ;
- ou éthanol (alcool) "absolu".

En détail

1- Violet de gentiane - adaptation de Hucker :

SOLUTION A :
- *violet de gentiane : 10 g
- *alcool à 95° : 200 ml

SOLUTION B :
- *oxalate d’ammonium, 1 H2O : 8 g
- *eau distillée : 800 ml.

- Mélangez les solutions A et B, Laisser reposer 24 heures avant l’emploi.
- Versez à travers un papier filtre dans un flacon.

1 bis- Violet de gentiane - préparation alternative : Violet de gentiane phéniqué :

ATTENTION : la manipulation du phénol cristallisé nécessite le port de gant et de lunettes de protection, le produit étant corrosif.

Dans 1 mortier broyer et mélanger :
- violet de gentiane : 10 grammes
- phénol cristallisé : 20 grammes
- alcool éthylique 95° : 100 ml

Quand le mélange est bien homogène, le verser dans un récipient de 1 l.
Rincer le mortier avec 100 ml d’eau distillée chaude et verser dans le récipient.
Compléter à 1 l.

Laisser reposer à température ambiante pendant 24 heures et filtrer.

A tenir à l’abri de la lumière.

2- Solution iodée de Gram ou lugol

- iode : 10 g,
- iodure de potassium : 20 g,
- eau distillée : 1 l.

Dissolvez d’abord l’iodure de potassium dans environ 30 ml d’eau distillée. Mélangez jusqu’à dissolution complète. Ajoutez l’iode et mélangez jusqu’à dissolution. Ajoutez le reste d’eau distillé et mélangez. Conservez dans un flacon en verre brun ou en plastique opaque (à l’abri de la lumière).
NB : on peut utiliser de la Bétadine jaune.

3- Solution de safranine

- safranine 0 : 25 g ,
- alcool à 95° : 100 ml,
- compléter par une solution aqueuse à 25 g/l d’oxalate d’ammonium à 1 l.

3 bis- Solution de fuchsine

- broyez dans un mortier :

  • fuchsine basique : 10 g,
  • acide phénique cristallisé ou phénol cristallisé : 50 g,
  • alcool à 95° : 100 ml,

- reprenez par 100 ou 200 ml d’eau distillée chaude,
- laissez reposer 24 heures,
- complétez à 1 l,
- filtrez et conservez en flacon bouché,

Avant utilisation, diluez la fuchsine au 1/10 dans de l’eau distillée.

Attention cette dilution ne se conserve que quelques jours : n’en préparez que de petites quantités.

4- Décolorant

- Mélangez à parties égales alcool à 95° et acétone (décoloration : 10 sc),
- ou alcool à 95° pure (décoloration : 30 sc).
Boucher bien ces flacons. A utiliser loin du bec ou autre flamme !

Conservation

En flacon hermétique, à l’abri de la lumière, de préférence au frais : plus de 3 ans sauf pour la fuchsine diluée.
Attention : filtrer lorsque l’on rempli les flacons pour l’utilisation quotidienne à partir des flacon de réserve.


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