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>>Étalons et droites d’étalonnage du spectrophotomètre

15 août 2015
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Etalons du commerce

Les étalons sont primordiaux pour de bonnes analyses biochimiques. Il est rare que l’on dispose d’étalons à coût abordable dans les pays en développement (mais Biolabo (http://www.biolabo.fr/) accepte de fournir quelques fois par an, gratuitement, des étalons aux laboratoires à qui leur en fait la demande motivée et justifiée).
Il est donc impensable de n’utiliser ces étalons du commerce que modérément et un "panachage" avec des étalons "maison" est donc utile.

Etalons maison

On utilisera des sérums de volontaires : patients cliniquement en bon état général (fractures récentes, par exemple) et/ou confrères et personnels du centre de santé.
Il faut au moins 4 personnes différentes auxquelles on prélèvera environ 20 ml de sang.

Toutes les manipulations doivent être faites le plus rapidement après les prélèvements. On prévoira donc de ne pas être interrompu.
- Ces sérums sont coagulés et centrifugés.
- On mélange les surnageants dans un petit flacon de 60 à 100 ml lavé et stérilisé. Le volume total de sérums mélangés doit être au moins de 40 ml.
- Ce mélange de sérums (sauf 3 ml (voir plus bas)) est aliquoté à raison de 0.5 ml, dans des petits récipients coniques en matière plastique (type Eppendorf.)
- Les aliquotes sont immédiatement congelés.
- Avec les 3 millilitres du mélange de sérums qu’on a laissé dans le flacon, on dose 3 fois de suite pour chaque analyte que l’on pratique dans le laboratoire et on calcul la moyenne des trois résultats.
- On compare à un quatrième dosage effectué avec l’étalon du commerce correctement reconstitué : on connait donc la valeur des étalons maison par rapport à l’étalon du commerce.

Exemple pour la glycémie :

Etalons Maison Etalon Commerce Ecart
Mesures N° 1 N° 2 N° 3 Moyenne N° 4
Résultats 5,2 4,8 5,3 5,1 4,9 0,2

Avec 50 ml de sérums mélangés on obtiendra ainsi plus de 80 tubes de contrôle soit, pour 5 jours de dosages par semaine, 16 semaines (presque 4 mois) de contrôles. Cette préparation est donc à faire seulement 3 fois par an.

Créatinine et urée urinaire

On utilisera 30 ml de sa propre d’urine ou de celle d’un collègue, pourvu qu’on ne présente pas de pathologies, en particulier urinaire, diluée au 1/10, que l’on dosera 3 fois de suite et qu’on comparera à l’étalon du commerce, de la même manière.

Les droites de régression Concentration = f(Absorbance)

Elles doivent être effectuées impérativement sur papier millimétré. Ensuite, chaque technicien connaîtra la stabilité de ses droites.


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