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>>Etalonnage du taux de prothrombine (TP) : la droite de Thivolle.

27 février 2016
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Quand faut-il refaire la droite d’étalonnage ?

- Obligatoirement à chaque fois qu’on change le lot de thromboplastine,
- lorsque l’on doute de la qualité des résultats des TP des patients.

Produits nécessaires.

- Plasma dont le TP est connu avec précision.
- Solution tampon d’Owren – Köller (à défaut : tampon HEPES (in coffret « Bio Fibri » de Biolabo SAS® [1])).
- Coffret de dosage de prothrombine (ex : in Produit Biolabo® : « Bio TP »).

Comment disposer d’un plasma dont le TP est connu avec précision ?

Deux possibilités :
- utiliser un pool de plasma citratés de sujets normaux,
- utiliser un pool de plasma de contrôle Biolabo.
On préfèrera la 1° solution.

Choix des sujets pour étalonner.

On choisira 3 ou 4 personnes, volontaires, en bonne santé, n’ayant pris aucun médicaments depuis au moins 2 jours.

Prélèvement des sujets pour étalonner. Traitement du sang.

On procèdera comme pour la mesure du temps de Quick ou taux de prothrombine :

- Sujets à jeun depuis au moins 3 heures.
- Sangs prélevés en tubes contenant une solution de citrate de Na (en tubes standard : à bouchon bleu). Prélever jusqu’au trait de jauge marqué sur l’étiquette.
- Homogénéiser immédiatement par 10 retournements successifs.
- Centrifugation dans un délai inférieur à 2 heures après la ponction veineuse.

Prélever 1 ml de chaque plasme et transférer dans un tube à hémolyse. On dispose ainsi de 3 ou 4 ml de plasma dans le tube.

On considère que le TP de ce pool est égal à 100%.

Utilisation de plasma de contrôle Biolabo.

Reconstituer 2 flacons de 1 ml (ou, mieux, 3 flacons) de plasma de contrôle Biolabo pour tests de coagulation « Taux normal » et mélangez-les.

On considère que le TP de ce plasma de contrôle est égal à la valeur cible indiquée sur la notice (par ex. : 90%).

Dilutions du pool de plasma normaux ou du plasma de contrôle.

Pour réaliser une droite d’étalonnage il faut au moins 3 points. Il faut donc diluer le plasma normal.

Dans 3 tubes à hémolyse introduire puis homogénéiser :

Tubes : Tube 1 Tube 2 Tube 3
Pool de plasma ou plasma de contrôle (PC) 1 ml 0,5 ml 0,5 ml
Solut. tampon 0 ml 0,5 ml 1 ml
taux prothrombine avec :
un pool plasma : TP 100 % TP 50 % TP 33 %
le plasma de contrôle (PC) = taux du PC = taux du PC/2 = taux du PC/3

Attention : il est bien évident que si, au lieu du pool de plasma de sujets normaux on utilise du plasma commercial à taux normal le TP de ce plasma non dilué n’est pas nécessairement 100% : c’est la valeur mentionnée sur la notice du fabricant.
Par exemple : si la valeur mentionné sur la notice est 90 %, la valeur du TP dans la dilution au ½ sera 45 % et celle de la dilution au 1/3 sera 30 %.

Déterminer le temps de Quick (TQ) de chacune de ces 3 dilutions.

On procédera, pour les mesures comme dans la fiche Mesure du temps de Quick ou taux de prothrombine (TP).
On obtient donc 3 résultats.

Introduire les résultats trouvés à l’intérieur du coagulomètre ST4 de Diagnostica Stago® [2].

- Ne pas oublier d’y inscrire aussi le numéro de lot du nouveau coffret « Bio TP »
- Inscrire aussi la valeur d’ISI mentionnée sur la notice du nouveau coffret.
- S’assurer que les 3 points d’étalonnage sont situés sur la droite (ou très proche de la
droite) que le ST4 imprime.
- Si l’un des 3 points s’écarte de cette droite il faut refaire entièrement la manipulation à partir du point : "Dilutions du pool de plasma normaux ou du plasma de contrôle".


notes

[1Biolabo SAS, en plus de sa gamme d’appareils de biochimie et de coagulation, fournit des réactifs déshydratés et lyophilisés (hémostase) adaptés au milieu tropical, disponibles chez de nombreux distributeurs (formés) dans les pays défavorisés). Biolabo propose gratuitement des programme de contrôle de qualité externe, kit complet permettant chaque mois de déterminer les valeurs de 20 paramètres de biochimie sur 2 niveaux, et chaque trimestre des paramètres d’hémostase primaire.
http://www.biolabo.fr/. Les Hautes Rives, 02160 Maizy, France. support@biolabo.fr ou adv@biolabo.fr (interconnectés)

[2Stago : 3 allée Thérésa, CS 10009, 92665 Asnières sur Seine Cedex, France. Téléphone : +33 (0)1 46 88 20 20. Site : www.stago.com. Mail : webmaster@stago.com.

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